文獻速遞 | 美國(guó)藥典場訊委員會(huì)發(fā)表GC-MS/MS分析6種(zhǒng)痕量亞硝胺看南雜質方法的論文

      藥品原料藥和制劑的生産過習紅(guò)程中，不可避免地會(huì)産生或引入影響藥物穩定性甚至威脅人中著類健康的雜質，比如在血管緊張素風廠受體拮抗劑 (ARB)、雷尼替丁及其他藥物中發(fā)現潛理通在緻癌物-亞硝胺雜質。1987年亞硝胺類化合物知哥（NAs）被(bèi)國(guó)際癌症研究機構（I雪輛ARC）列入緻癌物清單，2017也林年國(guó)際人用藥品注冊技術協調會(huì)（ICH）評估和控制藥物中關動DNA反應性（緻突變）雜質的ICH M7指導原則將(jiāng)開了緻癌風險高的NAs列爲“關注隊列”。

　　在酸性條件下，若仲胺、叔胺或門了季胺和亞硝酸鹽同時(shí)存在看暗，則有可能(néng)形成(chéng)亞硝胺。藥物原料藥生産過(guò)體雜程中采用的起(qǐ)始原料、試劑、催化劑、溶劑、中間體飛房以及被(bèi)污染的設備和試窗頻劑都(dōu)有可能(néng)造成(ché你技ng)亞硝胺雜質的生成(chéng)。此外，藥技問物制劑過(guò)程中采用的輔料以及藥物因儲藏條件而發愛少(fā)生氧化、分解等反應也會(huì)在藥物中引入亞硝術妹胺雜質。其中有機溶劑在API生産及藥品的分離、純化過(guò)程中發(農弟fā)揮著(zhe)至關重要的作用，根人你據FDA（美國(guó)食品藥品監督管理局）和EMA（歐洲藥品監督管理局紅器）的指導原則，藥品生産過(gu美匠ò)程中使用的有機溶劑是亞硝胺雜質的潛在根源之厭拿一。因此對(duì)藥物及藥品生産使用有機溶劑中件喝亞硝胺類雜質的種(zhǒng)類、含量測業開定和成(chéng)因分析，近年來已成(chéng)拍上爲制藥行業關注的重點。

　　爲應對(duì)亞硝胺危機，USP（美大吃國(guó)藥典委員會(huì)）經(jīng)方法測試及門相風險評估後(hòu)建立了幾個亞硝胺參考标準，并發(f通你ā)布了新的《美國(guó)藥典—短鄉國(guó)家處方集(USP-NF) 》通則<1469>亞硝胺雜質，以支持行業分析和監測藥品供應鏈中的亞硝事雪胺。2020年版《中國(guó)藥典》四坐算部通則9306亦有體現，國(guó)家藥品監督管理局藥品審評中心并于2020子自年5月8日發(fā)布了《化學(xué)藥物中亞硝胺類雜還業質研究技術指導原則（試行）》的通告（2020年靜說1号）。

　　FDA曾報告了一種(zhǒng)采用GC-MS/MS結合直接進(jìn樹坐)樣(yàng)的方法測定有機溶劑中NDMA、NDEA訊醫、NEIPA、NDIPA和NDBA等亞硝胺雜質，但對(d答厭uì)于未知雜質較多的商用級溶劑的分析中，對(duì)于未知雜質幹擾的排除風紙及未知雜質與亞硝胺雜質峰的分離度方面(miàn)電章還(hái)面(miàn)臨一些挑戰。基于此，USP使用島津高煙樹靈敏度GCMS-TQ8050 NX三重四極杆氣地北質聯用系統開(kāi)發(fā)了一種(zhǒng內業)高靈敏度的GC-MS/MS分析方法，用于二氯甲烷、爸微乙酸乙酯、甲苯和鄰二甲苯溶劑中同時(shí)測定新錢六種(zhǒng)亞硝胺雜質(NDMA亮雪、NDEA、NEIPA、NDIP麗海A、NDPA和NDBA)，并驗證了該方法的有效性。

注：所有溶液均在棕色容量瓶中配制

1、方法開(kāi)發(fā)

　　商用溶劑中存在較多的幹擾雜質以明道至于影響亞硝胺的準備識别，通過(guò)優化MRM離子對(d也農uì)、碰撞能(néng)量以減少吧暗未知雜質的幹擾（MRM條件優化結果見下表1）器習，此外對(duì)柱溫程序也進(jìn)行優化，并改東店變檢測器增益（0.8kv）以提學電高方法的靈敏度（相對(duì)于商用溶黑紅劑樣(yàng)品濃度達到100 ppb）。同時(shí)對(d舞的uì)于樣(yàng)品濃度，經(jīng)討司測試樣(yàng)品濃度爲25 mg/mL時(shí)可以減少幹擾并保器雪持高的靈敏度。由于亞硝胺的原位形月湖成(chéng)，GCMS使用的高溫可能(nén什就g)會(huì)導緻亞硝胺測試結果偏高。通過(guò)空白事銀進(jìn)樣(yàng)，未觀察到亞硝胺出峰位置有幹擾。此外室溫下48h穩月朋定性測試亦未發(fā)現亞硝胺雜質發(為很fā)生變化。

　　進(jìn)一步使用分析級溶劑道兵對(duì)方法進(jìn)行驗證，再次證實了原FDA方法商用溶做日劑中未知雜質影響了分析方法的靈敏度，其中相對(duì)于10門睡0 mg/mL的樣(yàng)品濃度NDMA、N玩作DEA、NEIPA、NDIPA、NDPA的LO讀業Q爲5 ppb，NDBA的LOQ爲13 p路多pb。與FDA報道(dào)的方法相比，優是木化後(hòu)的方法對(duì)不腦物同純度溶劑樣(yàng)品中亞硝胺的分析具有良好(h飛好ǎo)的分離度和高靈敏度。

表1  6種(zhǒng)亞硝胺的MRM條件（離子對土門(duì)、CE值、掃描時(shí)間）

注：N-亞硝基二甲胺（NDMA）、N朋線-亞硝基二乙胺（NDEA）、N-亞硝基乙基異丙基胺東喝（NEIPA）、
N-亞硝基二異丙胺（NDIPA）、N-亞硝基二苯胺（NDPA）你小、N-亞硝基二丁胺（NDBA）

2、方法學(xué)驗證

　　用所建立的GC-MS/MS土個方法對(duì)二氯甲烷、乙酸乙酯、甲苯和鄰二甲苯等商用溶劑和分析級溶到師劑中的6種(zhǒng)亞硝胺身視進(jìn)行測定，驗證标液濃度完全覆蓋FDA相關限值要求，通過(guò)色譜日河分離專屬性、線性、準确度、重複性、中間精些匠密度等多個指标驗證了該方法的可靠性。驗證方法及結低紙果分見表2和圖2 。

表2 方法學(xué)驗證程序及結果

RLL-低濃度水平加标回收率（5 ppb* (NDMA、NDEA、NEI得劇PA、NDIPA、NDPA)和13 ppb*(NDBA) ）
RML-中濃度水平加标回收率（1000 ppb* 分見）
RUL-高濃度水平加标回收率（2000 ppb*）
*：相對(duì)于100 mg/mL的樣(著南yàng)品濃度

圖2 （A) LOQ溶液色譜圖 （0.5 ng/mL (NDMA、NDEA高能、NEIPA、NDIPA、NDPA)和1.3 ng/兒少mL (NDBA)）
(B)  MRM-1和MRM-2提取離子色譜圖

3、樣(yàng)品分析

使用經(jīng)驗證的方法對音門(duì)二氯甲烷、乙酸乙酯、甲苯和鄰二甲苯等商用溶劑進(jìn)行測試，結果暗又發(fā)現，甲苯被(bèi)550 ppb的坐業NDEA污染，鄰二甲苯被(bèi)火醫120 ppb的NDEA和3400 ppb的NDBA污染。在上章人述商用溶劑和其他分析級的二氯甲烷和黃器乙酸乙酯溶劑中未檢測到亞硝胺。

　　溶劑在制藥工業中被(bèi)廣泛用作原料藥和制劑的反應介質和其他步驟。溶從低劑生産和運輸過(guò)程中添加的化學(xu山些é)品、生産過(guò)程中的污染以及溶劑回收等都(dōu)是商用溶劑中亞知件硝胺的潛在來源。USP使用島津高靈敏度的GCMS-TQ8050 睡遠NX系統開(kāi)發(fā)了在藥品生産中廣泛使用的二氯甲烷、乙酸森會乙酯、甲苯和鄰二甲苯溶劑中的六種(zhǒng聽火)亞硝胺的高靈敏度的檢測方法，該方法對(duì)于商用級和工白分析級溶劑都(dōu)能(nén書工g)實現滿意的檢測效果。

 

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