“70萬一針”寡核苷酸藥物進(jìn)醫保，此類藥是樂物的分析與表征您知道(dào)嗎？

　　寡核苷酸藥物通常指由人工合成(chéng)的長(cháng)度50個答吧以内核苷酸組成(chéng)的一類藥物，雨老包含單鏈或雙鏈DNA或RNA。目前研究較多的是反義寡核苷酸藥物（A街討SO）和小幹擾RNA藥物(siRNA)。與媽湖小分子藥物和單抗藥物靶向(xiàng)蛋白質不同，快作寡核苷酸藥物通常靶向(xiàng)mRNA，從轉錄後(hòu)水平進(jìn)山相行治療，具有特異性好(hǎo)、有效性用答高和長(cháng)效性突出的優勢。

　　爲了保證産品的安全性和有效性，寡核苷酸藥物通常需要從分子量、堿基序列、解鏈溫度Tm、産品純度、厭農有關物質等方面(miàn)進(jìn)行分析，需要使用質譜、生物的請惰性液相色譜、紫外分光光度計等儀器，島津公司關要開(kāi)發(fā)了一系列的解決方案，供您參考。

分子量表征

　　寡核苷酸藥物通常使用固相亞磷酰胺化學(xué)法進(jìn)行鐵雪合成(chéng)，亞磷酰胺單體是合成(chéng)的關鍵原白地料。寡核苷酸藥物的分子量則是其重要的産品屬性。因此，檢測寡核化哥苷酸藥物及其合成(chéng)用原料區媽亞磷酰胺單體的分子量是常用的質量控制手段。常用的分子量南明檢測方法是質譜法。島津質譜産品四極杆飛行時(sh喝銀í)間質譜儀（LCMS-903慢煙0）、單四極杆質譜儀（LCMS-2050）和基質輔助激光解吸電離飛行時(shí唱醫)間質譜（MALDI-8030）都(dōu)是寡核苷酸又區藥物及其原料分子量表征的常用儀器。下面(miàn)就(jiù)爲大家帶來物廠QTOF LCMS-9030測定寡核苷酸藥購購物精确分子量和MALDI-80舊錯30測定亞磷酰胺單體分子量的精腦窗彩案例。

LCMS-9030分析寡核苷酸藥物分子量

　　島津四極杆飛行時(shí)間質年作譜 LCMS-9030具有高分見這辨率、高質量數準确度和媲美三重四極杆靈敏度的特點從從，可以準确測定寡核苷酸分子量。鐘高寡核苷酸分子帶負電，通常使用ESI負離子模式檢測，在質譜圖上常觀風哥測到一系列的多電荷離子，需要進(jìn)行解卷中影積處理，得到寡核苷酸分子量。

LCMS-9030結合Insight Explore工腦 CSD分析結果

　　寡核苷酸藥物序列: 5'-mG-mC*-mC*-mU*-mC*姐關-dA-dG-dT-dC*-dT-dG-dC*-dT-動樂dT-dC*-mG-mC*-mA-mC*-mC*微笑-3'
理論單同位素分子量：6431.7239

　　采用QTOF LCMS-90明吃30采集一個長(cháng)度爲2都紙0 mer的寡核苷酸藥物的高分村算辨質譜圖，使用Insight Explore CSD進(jìn)行解卷積處理西北，得到實測單同位素分子量爲643校都1.7236，質量數偏差爲0.05 ppm。

MALDI-8030分析亞磷酰胺單體的分子量

　　采用MALDI-8030測定了四種(zhǒn紙能g)亞磷酰胺單體的分子量，在線性正離子模式下，均檢測到顯著質譜峰，質荷比大小與劇看鉀離子加合峰相符。MALDI-803上刀0體積緊湊、分析速度快、維護方便，是寡核苷酸樣(yàng媽數)品分析的有力工具。

序列确認

　　寡核苷酸的序列同設計序列一緻，是保證藥物有效性的重要方面(miàn機窗)。采用MALDI-8030測定了長(cháng)度爲20 mer聽日的一種(zhǒng)寡核苷酸的分子量和堿基序列。寡核苷酸的MADLI-TOF外短質譜圖主要以單電荷和雙電荷形式存在，可直接讀出分子店行量，操作簡單，結果直觀。利用源内裂解技術（ISD），寡核苷酸更傾向(xià街家ng)于形成(chéng)w型碎裂離子，碎裂離子譜圖更簡單。通過討做(guò)比對(duì)這(z森到hè)些碎片離子信息，可以較容易地讀就服出核酸序列。

寡核苷酸MALDI-ISD-TOF質譜圖和碎裂離子

解鏈溫度（Tm）

　　随著(zhe)溫度升高，雙鏈核酸分子的雙鏈結構開(kāi)始唱腦打開(kāi)，最終變成(chéng)兩(liǎng)樂關條單鏈的結構。Tm是雙鏈核酸分子雙鏈結商聽構解開(kāi)一半時(shí)的溫頻麗度，是雙鏈核酸分子結構穩定性的重要指标志雨。使用島津UV Tm分析系統可以非常方便志用地測定雙鏈核酸分子的Tm。該系統由紫外分光光度計、電化能熱溫度控制單元和Tm分析軟件組成(chéng)。Tm分析軟件可以校為控制溫度控制單元準确控溫，升溫速率12檔可調，可滿足雙鏈他也核酸分子解鏈曲線的連續測定。Tm分析軟件還(hái)可以自動分析解鏈曲線火著，給出準确的Tm數值。

UV Tm分析系統組成(chéng)（左）和核森藍酸樣(yàng)品Tm分析結果（右）

純度分析

　　使用生物惰性液相Nexera XS Ine城外rt結合Shim-pack Scepter C18和微色譜柱進(jìn)行了寡核苷酸樣(yàng)品的亮東快速純度分析，寡核苷酸和其雜質分離良好(hǎo)。東市即使在50℃高溫、0.1M TEAA的鹽濃度條件下分析，也表現出良好(車老hǎo)的穩定性。基于有機雜化顆粒矽膠技術的Shim-pack 草行Scepter C18，适合用于寡核苷酸純度以愛好及雜質分析。

12 mer寡核苷酸樣(yàng)品純度分析UHPLC色譜圖

遞送介質分析

　　遞送介質是將(jiāng)核酸藥物遞送至靶組織，穿透細胞她黃膜，進(jìn)入細胞内部發(fā)揮藥自雨效的關鍵。脂質納米粒（LNP）和聚乙烯亮費亞胺（PEI）都(dōu)是核酸藥物的常用遞送介質。LNP通常包含陽動又離子脂質、膽固醇、PEG修飾脂質和輔助性中性脂質，四種(zhǒng)成(知筆chéng)分協同作用，將(jiāng)司舊寡核苷酸包裹并遞送到細胞内發(fā)揮作用。PEI又拍是一種(zhǒng)水溶性高分子聚合物，攜帶大量正電荷，可通過(gu長好ò)靜電作用結合核酸藥物，將(jiāng)其遞送至細票少胞内，并保護其免受核酸酶降解。遞送介質的為物含量檢測對(duì)寡核苷酸藥物給藥方式、藥學(xué)研醫爸究等具有重要意義。

　　利用島津生物惰性液相系統結合蒸發(fā)光散射檢測器ELSD-L頻亮T III建立了定量分析LNP中四種(路光zhǒng)成(chéng)分含量，以及P體路EI含量的分析方法。

　　天價寡核苷酸藥物首進(jìn)醫保，使得這(zhè)類藥物在近期迅速答小刷屏，備受關注。對(duì)寡核苷酸計用藥物進(jìn)行分析和表征，可以更好(hǎo)地保證産品的藥效和安全動多性。基于島津豐富的分析儀器産品線，我們利用QTOF LCMS-9030舞場、單四極杆質譜LCMS-2050、MALDI TOF質譜、UHPLC理化、UV Tm分析系統等技術平台，開(kāi)發(fā)了分子量表征、核苷酸序她離列确認、Tm測定、純度分析和遞送介質分花用析的方法，助力寡核苷酸藥物研發(fā)和質控，希望未來開(kāi)發(f玩慢ā)出更多更好(hǎo)的藥物，造福患者。